大鼠4-羥基雌二醇(4-OH-E2)Elisa試劑盒使用說明書

　　以下是天正信達(dá)關(guān)于大鼠4-羥基雌二醇(4-OH-E2)ELISA試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)化操作指南及關(guān)鍵注意事項(xiàng)：

　　一、試劑盒核心參數(shù)

　　檢測(cè)原理?

　　雙抗體夾心法，包被抗4-OH-E2抗體與HRP標(biāo)記抗體形成復(fù)合物，TMB顯色后通過OD值定量

　　檢測(cè)范圍：6ng/L-250ng/L(部分試劑盒為2-64pg/mL)

　　樣本要求?

　　樣本類型? ?處理規(guī)范? ?保存條件?

　　血清 靜置1-2小時(shí)后離心(3000×g,10分鐘) -20℃保存，避免反復(fù)凍融

　　血漿 EDTA抗凝，離心后取上清(5000×g,15分鐘) 分裝凍存≤3次

　　組織勻漿 生理鹽水勻漿后離心(3000×g,10分鐘) 立即檢測(cè)或-80℃保存

　　二、實(shí)驗(yàn)操作流程

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?

　　原倍標(biāo)準(zhǔn)品(400ng/L)按1:1梯度稀釋至12.5ng/L，需使用專用稀釋液

　　A[原倍標(biāo)準(zhǔn)品] --> B[200ng/L]

　　B --> C[100ng/L]

　　C --> D[50ng/L]

　　D --> E[25ng/L]

　　E --> F[12.5ng/L]

　　加樣與孵育?

　　每孔加樣50μL(樣本需預(yù)稀釋5倍)，37℃孵育30分鐘，封板膜密封

　　空白孔僅加稀釋液，標(biāo)準(zhǔn)孔與樣本孔需平行雙復(fù)孔

　　顯色與終止?

　　依次加入TMB顯色液(A+B液)，避光反應(yīng)15分鐘，終止液加入順序需一致

　　三、質(zhì)量控制要點(diǎn)

　　數(shù)據(jù)有效性標(biāo)準(zhǔn)?

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線R2≥0.9900，空白孔OD值<0.1

　　批內(nèi)變異系數(shù)(CV)應(yīng)<15%

　　干擾物規(guī)避?

　　避免使用含NaN3樣本(抑制HRP活性)

　　溶血樣本需離心去除血紅蛋白干擾

　　四、異常處理建議

　　高背景值?：檢查洗滌是否充分(建議浸泡30秒，重復(fù)6次)

　　無信號(hào)?：驗(yàn)證酶標(biāo)試劑活性及移液準(zhǔn)確性

　　重復(fù)性差?：校準(zhǔn)移液器并統(tǒng)一操作時(shí)間窗

　　注?：不同品牌試劑盒存在參數(shù)差異，建議以實(shí)際說明書為準(zhǔn)。

　　注：以上資料僅供參考，如需具體品牌產(chǎn)品的完整技術(shù)參數(shù)，建議提供貨號(hào)或廠商名稱以便進(jìn)一步確認(rèn)。

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