以下是關人γ干擾素誘導蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA試劑盒的實驗使用說明,綜合整理自不同來源的可靠信息: BS-0383人γ干擾素誘導蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA試劑盒 一、實驗原理? 該試劑盒采用?雙抗體夾心法ELISA技術?: 將捕獲抗體包被于微孔板上,結合樣品或標準品中的待測物IFI16p16。 加入生物素標記的檢測抗體,形成“捕獲抗體-抗原-檢測抗體"復合物。 通過鏈霉親和素偶聯的辣根過氧化物酶(HRP)催化底物TMB顯色,顏色深淺與待測物濃度成正比,終通過酶標儀測定吸光度(OD值)計算濃度。 二、試劑盒組成與儲存? 主要組分?: 包被抗體、檢測抗體、標準品、HRP標記物、顯色液(TMB)、終止液等。 儲存條件?: 未開封試劑盒需2-8℃避光保存;部分組分(如顯色液)需嚴格避光。 有效期?:通常為6個月,具體以標簽為準。 三、樣品處理要求? 血清/血漿?: 采集后室溫靜置2小時或4℃過夜,1000×g離心20分鐘,取上清保存于-20℃(避免反復凍融)。 組織勻漿?: 用預冷PBS沖洗組織,按1:9(重量體積比)勻漿,離心取上清。 注意事項?: 避免溶血、高血脂或含NaN3的樣本(NaN3抑制HRP活性)。 四、操作步驟? 試劑準備?: 標準品需現用現配,不可保存;洗滌液按1:50稀釋。 加樣與孵育?: 依次加入標準品/樣品、檢測抗體、HRP標記物,每步需充分洗滌。 顯色與讀數?: 加入TMB顯色10-30分鐘,終止液終止反應后,立即用450nm波長測OD值。 五、注意事項? 安全防護?: 避免接觸終止液和底物(有毒),操作時戴手套,勿用嘴吸取試劑。 實驗細節?: 加樣順序一致,避免氣泡;洗滌需拍干;顯色液避光保存。 質量控制?: 每個標準品和樣品建議做復孔;超出檢測范圍需稀釋后重測。 六、常見問題? 顯色異常?:若孔內呈綠色,表明終止液未混勻。 數據偏差?:可能由樣本處理、試劑批次或儀器誤差引起,需重復實驗驗證。 注:以上資料僅供參考,如需更詳細的操作圖示或標準曲線繪制方法,可參考試劑盒附帶的說明書或聯系供應商獲取技術支持。 |